木瓜蛋白酶的提取
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- 木瓜蛋白酶的提取從青木瓜中提取木瓜蛋白酶，用考馬斯亮藍結合法測定蛋白質濃度。通過本實驗，掌握天然活性化合物的提取和蛋白質濃度的測定技術。
實驗原理
木瓜天然酶
木瓜蛋白酶（papain），簡稱木瓜酶，又稱為木瓜酵素。他是一種含硫基（—SH）肽鏈內切酶，具有蛋白酶和酯酶的活性，有較廣泛的特異性，對動植物蛋白、多肽、酯、酰胺等有較強的水解能力，同時，它還具有合成功能，能把蛋白質水解物合稱為蛋白質。木瓜蛋白酶溶于水和甘油，水溶液無色或淡黃色，有時呈乳白色；幾乎不溶于乙醇。氯仿和乙醚等有機溶劑。其最適pH為5.7（一般3~9.5皆可），在中性或偏酸性時亦有作用，等電點18.75；最適溫度為55~60℃（一般10~85℃皆可），耐熱性強，在90℃時也不會完全失活；受氧化劑抑制，受還原性物質激活。
木瓜蛋白酶廣泛存在于番木瓜（Carica papaya）莖葉和果實中，以未成熟果實的乳汁中為最高。提取未成熟的番木瓜果實中的乳汁，采用現代生物工程技術提煉可得純天然生物酶制品。
考馬斯亮藍結合法（Bradford法）測定蛋白質濃度的原理
在一定范圍內，考馬斯亮藍G250蛋白復合物呈色后，在595nm下，吸光度與蛋白質含量關系呈線性關系，故可以用蛋白質濃度的測定。
實驗材料
1.材料
青木瓜
2.試劑
氫氧化鈉、磷酸、考馬斯亮藍G250、牛血清蛋白、95%乙醇
3.主要儀器設備
離心機、磁力攪拌器、刀片、電子天平、紫外可見分光光度計、冰箱、pH計。
實驗步驟
木瓜蛋白酶的提取
用薄不銹鋼刀片沿未成熟的番木瓜過時的縱線將果皮割破，深度為2~3nm，根據果實大小的不同，每個果實可以切5~10條刀口。
將木瓜放于一個大燒杯中，適度擠壓木瓜，使木瓜乳汁流入大燒杯中。
將手機的乳液按1:1量加入蒸餾水，攪拌1h，用NaOH將pH調至9.0。
將乳液用離心機在3500r/min的條件下，離心15min。
收集上清液至另一潔凈的燒杯中，得木瓜蛋白酶粗酶液，測量其體積，冰箱中保...
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